Hibridisasi in situ

Itu hibridisasi in situ adalah metode untuk mendeteksi penyimpangan kromosom. Kromosom tertentu ditandai dengan pewarna fluoresen dan diikat ke probe DNA. Teknik ini digunakan untuk diagnosis mutasi gen prenatal.

Apa itu hibridisasi in situ?

Dalam kasus hibridisasi in situ atau Hibridisasi in situ fluoresensi asam nukleat dari RNA atau DNA terdeteksi di jaringan atau sel tertentu menggunakan metode genetik molekuler. Biasanya, jenis diagnosis ini digunakan untuk mendeteksi kelainan kromosom struktural atau numerik selama kehamilan.

Untuk tujuan ini, probe yang diproduksi secara artifisial digunakan, yang terdiri dari asam nukleat. Kemudian mengikat asam nukleat dalam organisme melalui pasangan basa. Ikatan ini dimaksudkan dengan istilah hibridisasi. Bukti didasarkan pada struktur hidup pasien dan oleh karena itu sesuai dengan bukti in-situ. Ini harus dibedakan dari metode in-vitro yang pendeteksiannya dilakukan di dalam tabung reaksi. Metode ini dikembangkan pada abad ke-20 oleh ilmuwan Joe Gall dan Mary Lou Pardue.

Teknologi telah berkembang sejak saat itu. Sementara probe radioaktif digunakan pada saat itu, misalnya, probe berlabel fluoresensi dengan ikatan kovalen pada molekul penanda digunakan saat ini.

Fungsi, efek & tujuan

Hibridisasi in-situ biasanya digunakan untuk mendeteksi penyimpangan kromosom, yaitu anomali kromosom yang tidak dapat dideteksi dalam kariogram. Artinya, metode ini selalu digunakan bila penyakit keturunan akan ditentukan selama kehamilan.

Karena penyimpangan kromosom adalah masalah yang tidak boleh diremehkan saat ini, penggunaan metode ini meningkat seiring waktu. Hibridisasi terjadi dengan menggunakan sel asli dari cairan ketuban ibu. Dasar dari teknologi ini adalah pengikatan probe bertanda warna ke bagian DNA. Berkat penjilidan, jumlah salinan nantinya dapat dievaluasi dengan mikroskop, karena salinan individu memancarkan sinyal cahaya dan dengan demikian dapat dibuat terlihat di bawah mikroskop. Ada prosedur yang berbeda. Salah satu analisis dilakukan segera setelah pengikatan.

Dalam hal ini, pewarna fluoresen seperti biotin digunakan, yang terikat langsung ke probe DNA. Dengan metode hibridisasi in situ tidak langsung, evaluasi tidak dapat dilakukan segera setelah hibridisasi, karena zat fluoresen hanya dapat mengikat probe setelah hibridisasi. Metode tidak langsung ini lebih sering digunakan daripada metode langsung karena dianggap lebih sensitif. Selain probe DNA sentrometer spesifik kromosom, ada juga probe DNA spesifik lokus, probe perpustakaan DNA spesifik kromosom, dan hibridisasi genom komparatif.

Probe DNA sentrometer spesifik kromosom dapat digunakan untuk mendeteksi anomali numerik kromosom. Ini berarti bahwa mereka terutama digunakan ketika ada kecurigaan kromosom digandakan atau dihapus. Probe DNA spesifik lokasi sangat cocok untuk mendeteksi mutasi minimal yang tidak dapat dideteksi dalam kariogram. Pemeriksaan pustaka DNA khusus kromosom digunakan secara khusus untuk mendeteksi penyisipan dan translokasi.

Hibridisasi genom komparatif, di sisi lain, adalah analisis komprehensif tentang kehilangan dan perolehan materi kromosom. Saat ini, hibridisasi in-situ sangat penting dalam diagnosis berbagai mutasi kromosom.Dalam diagnosis sindroma Down, probe berikatan dengan kromosom 21, misalnya untuk tujuan ini, probe khusus kromosom biasanya digunakan, yang dapat digunakan jika dicurigai penyakit ini.

Kecurigaan bisa muncul, misalnya jika sebelumnya orang tua pernah melahirkan anak dengan penyakit tersebut dan citra USG tidak normal. Jika ada rangkap tiga dan bukan ikatan rangkap dan dengan demikian keluaran sinyal warna rangkap tiga, diagnosis dianggap terkonfirmasi.

Resiko, efek samping & bahaya

Berbeda dengan PCR, misalnya, hibridisasi in-situ secara signifikan lebih tidak rentan terhadap kontaminasi. Selain itu, waktu yang dibutuhkan untuk proses tersebut sangat sedikit. Namun, karena embrio dalam bentuk pola kromosom tertentu, suatu pola tidak dapat digunakan untuk menentukan dengan pasti distribusi kromosom lainnya dan dengan demikian status genetik sel lain.

Sinyal warna juga dapat tumpang tindih atau tetap tidak terlihat karena alasan lain. Akibatnya, hibridisasi in-situ sebagai alat diagnostik relatif rentan terhadap kesalahan selama kehamilan. Kesalahan diagnosis dapat muncul dan orang tua mungkin memutuskan untuk tidak memiliki embrio yang sehat. Untuk mengurangi kerentanan terhadap kesalahan hibridisasi in situ, setidaknya dua sel embrionik harus diperiksa secara bersamaan. Dengan memeriksa dua sel secara paralel, sekarang hanya ada risiko kesalahan diagnosis yang dapat diabaikan.

Dalam kasus seperti itu, orang tua benar-benar dapat mengandalkan diagnosisnya. Hibridisasi in-situ tidak ditawarkan kepada setiap wanita hamil, tetapi hanya untuk wanita dari kelompok risiko. Meskipun demikian, wanita hamil tidak menolak diagnosis jenis ini atas permintaan mereka sendiri. Temuan ultrasonografi yang tidak normal atau serum yang tidak normal dapat mendorong dokter untuk menawarkan prosedur diagnostik. Meskipun sebagian besar, tetapi tidak semua, penyimpangan kromosom dapat didiagnosis menggunakan hibridisasi in-situ.

Oleh karena itu, hibridisasi in situ tidak boleh dilakukan sendiri, tetapi harus selalu digunakan dalam hubungannya dengan uji kromosom konvensional. Perawatan wanita hamil memainkan peran utama dalam prosedur ini. Sebelum dilakukan analisis, terlebih dahulu dilakukan diskusi mendalam dengan calon ibu tentang metode diagnostik yang menjelaskan tentang risiko, kemungkinan dan batasan teknologi.